1　序言

草甘膦是一种有机磷农药，它可以杀死单子叶双子叶杂草，也可以从植物的一处转移到另外一处，由于这种优异的性能，草甘膦已经是世界上销量最高的除草剂。我国的草甘膦年产量大概在30万吨，约占全球产量的45%，出口量在70%以上^[1]。转基因作物在耕种过程中草甘膦用量不断增加，致使其中除草剂残留增加。早期认为草甘膦是低毒无害的，易降解的，但后期人的尿液中却检测到有草甘膦，说明其参与了人体的新陈代谢，可以通过植物传导给人体。近期研究表明草甘膦与肾脏问题、生育困难、糖尿病、癌症、心脑血管疾病、抑郁症等疾病存在因果关系^[2-3]。2001年的欧盟评估报告表明草甘膦的平均半衰期为30天，对哺乳动物，飞行类动物、鱼类没有食物链富集现象对水藻水蚤的影响短时间内也可以恢复^[4]。草甘膦的代谢产物：

国内也有利用高效液相色谱法对草甘膦进行定量分析和定量分析，但是主要测定的是地下水和土壤中的草甘膦残留量。国际食品法委员会制定出大豆中草甘膦的残留限量标准为20mg/kg^[5]，我国还没有制定出大豆中草甘膦的这个标准，并且国内检测转基因大豆中草甘膦残留量的研究未见报道过，于是转基因大豆中草甘膦的残留成了人们关注的问题。

1.1草甘膦的测定方法

大豆是最主要的粮食和粮油作物之一，其中含有丰富的营养成分，蛋白质（pr）的含量在40%左右，脂肪含量在20%左右，大豆中还有许多纯天然维生素及钾（K）、钙（Ca）、镁（Mg）、铁（Fe）、锌（Zn）等矿物元素^[6]。要想检验转基因大豆中草甘膦的含量需要排除这些营养物质的干扰，科学家们也做了大量的研究，测定草甘膦的方法主要有光谱法和色谱法等化学方法，酶抑制法和免疫法等生物方法，但是主要集中在地下水及土壤中草甘膦的检测。

1.11光谱法

光谱法适合对草甘膦进行定量分析，对定性分析也有帮助。其原理是利用物质内部原子结构电子的跃迁，电子在一定波长下从基态跃迁到激发态，电子在不同能级之间跃迁而产生不同波长的光，然后分析波长和强度。光谱法准确度高、精密度好、选择性强。其中经常用作定量分析的光谱法包括紫外分光光度法，褪色分光光度法和吸光光度法等等，这些方法操作简单，但分析大部分会有干扰离子^[7]。董文庚^[8]将草甘膦进行亚硝酸化，再加碘化钾则有碘单质生成，利用碘单质与淀粉生成蓝色络合物，绘制吸光度与浓度的关系绘制线性曲线，从而可以定量分析。加入EDTA可以消除一些金属离子的掩蔽作用，这种方法的回收率为95.1%到104%。

1.12色谱法

色谱法主要指气相色谱法（GC），薄层色谱法（TLC），高效液相色谱法(HPLC)及离子色谱法。草甘膦在流动相中的分配系数大于在固定相中的分配系数，从而使得与其他物质分离，经过仪器处理将浓度转化为电信号^[9]。马为民^[10]先将样品用三氟乙酸、三氟乙酸酐及三甲基原甲酸酯进行衍生化预处理，再采用气相色谱法测定了苹果、桃、胡萝卜中草甘膦的残留量。高效液相色谱法是测草甘膦最常见的方法，国内对草甘膦的测定主要集中在地下水方面。如刘铮铮^[11]测定了水中草甘膦的浓度，司友斌^[12]等了测定土壤中草甘膦的含量；候占伟^[13]、周艳明^[14]等分别采用不同的衍生方法和检测器，奠定了地下水中草甘膦含量的测定。

近些年国内又有少部分人利用高效液相色谱法测定食品中草甘膦的残留，周艳明^[15]等人测定了板栗中草甘膦的含量，使用的是荧光检测器；李波^[16]等人还测定了大豆、小麦、玉米、甘蔗等食品中草甘膦的含量，运用的是串联质谱-高效液相色谱结合的方法。但目前为止，检测转基因大豆中草甘膦的残留量在国内的研究中依然未见报道。

1.13 酶抑制法

酶抑制法利用的是草甘膦的毒性，有机磷农药可以抑制酶的活性，抑制作用与浓度成正比。把酶和样品混合，如果没有草甘膦，则底物和试剂有显色反应；如果酶的活性被抑制，加入显色剂后显色不明显。通过用分光光度法可以测定吸光度随时间的变化，从而计算出抑制率。这种方法前处理简单，能迅速判断出对所用酶有抑制作用的草甘膦，但是植物中叶绿素、花青素等会对检测有影响，利用层析柱可以解决这些问题^[17]。

1.14免疫法

免疫法是生物方法，原理是抗体与抗原的特异性关系，有着特异性强和灵敏度高的优点，而且现场可快速测定，但这种方法对抗体的品质要求很高。免疫法被普遍的应用于食品行业。

1.15其他方法

草甘膦的测定还有多种方法，比如毛细管电泳法、化学滴定法、核磁共振等。周洁薇^{[18- 19]}提出用溴百里酚蓝测定草甘膦的方法后，又进行了改进，用硝酸铅做标液、碘化钾做指示剂，两步分析法使结果更加准确。

1.2高效液相色谱法的原理及应用

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术，具有高分辨率、高灵敏度、重复性好、定量精度高、分析速度快等优点。液相色谱不仅可用于分离分析，还可用于制备纯样品.液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备样品。便于为红外，核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。相对于气相色谱，高相液相色谱法的流动相体现了分离机制，其组成、比例和酸碱度均可以自由调节，这样更加便于分离，体现了很明显的优势^[20-23]。液相色谱尚缺乏高灵敏度，通用型的检测器，液相色谱柱子昂贵；要消耗大量溶剂；液相色谱仪器比较复杂；操作严格；价格也较气相色谱仪昂贵；主是因为采用了高压泵在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。但因为草甘膦缺少可以被检测的官能团，因此运用高效液相色谱法测定样品前，需要进行前处理或者柱前、柱后衍生处理。常用的衍生试剂柱前主要是亚硝酸盐和碘化钾，柱后主要是邻苯二甲醛。